DNA分型技術(shù)實(shí)驗(yàn)流程 DNA typing

自從DNA被發(fā)現(xiàn)以來，人們通過研究拓展了DNA在各種領(lǐng)域的不同應(yīng)用。其中DNA分型技術(shù)在法醫(yī)物證鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用給法醫(yī)界帶來了一次革命性的改變。人體的DNA是由A,T,G和C四種堿基組成的，任意兩個人之間大約99％的DNA序列是一樣的，要區(qū)分兩個人，就需要鑒定兩個人那不同的1％的DNA。當(dāng)然1％的DNA包含的遺傳信息其實(shí)已經(jīng)非常龐大了，我們不需要鑒定全部不一樣的，只要鑒定一些容易的，足夠區(qū)分兩個人的DNA就行了。

一、樣本制備
1、 一般采用FTA卡、棉簽、膠帶等載體對物證上的DNA進(jìn)行采集并保存。
2、 使用核酸提取試劑盒和自動化提取儀器對樣本進(jìn)行DNA提取，主要的提取方法有chlex-100法、磁珠法、離心柱法。目前主流的試劑盒有AGOWA（LGC）、法醫(yī)樣本試劑盒（洛陽惠爾納米），儀器有HR003核酸提取儀、HQIAcube等。

二、STR復(fù)合擴(kuò)增
STR是Short Tandem Repeats的縮寫，中文一般翻譯成“短重復(fù)堿基序列”，不過大部分情況下都不翻譯，直接用“STR”，簡單明了。人的DNA中大約有15～20％的序列是重復(fù)性的堿基序列，顧名思義，STR是重復(fù)序列比較短的那種，通常是2～7個堿基，這種STR大概有3萬個，也就是平均1萬個堿基就能碰上這么個STR序列。從生物技術(shù)角度講，長度為4的重復(fù)序列是最適合做位點(diǎn)的STR了。舉個例子，比如在TH01這個位點(diǎn)上，一個人的序列可能是-AATG-AATG-AATG-，這兒出現(xiàn)了3個重復(fù)的的AATG，可以縮寫成(AATG)3，而另外一個人可能是-AATG-AATG-AATG-AATG-，用專門的儀器，我們可以很容易的區(qū)分這兩個不同的序列。也可能出現(xiàn)比較復(fù)雜的情況，比如VWA這個位點(diǎn)是TCTA(TCTG)3－4(TCTA)n。位點(diǎn)上等位基因的命名是根據(jù)重復(fù)序列出現(xiàn)的次數(shù)來確定的，出現(xiàn)了5次這個等位基因就叫“5”。復(fù)雜點(diǎn)的情況可能是“9.3”，意思就是9個重復(fù)序列加3個堿基，實(shí)際情況是(AATG)6ATG(AATG)3。
1、 常染色體位點(diǎn)和Y染色體位點(diǎn)的擴(kuò)增。
2、 試劑盒：Identifiler Plus PCR擴(kuò)增試劑盒（AB公司）、Yfiler PCR擴(kuò)增試劑盒（AB公司）、Goldeneye 16A試劑盒（基點(diǎn)）、AGCU 10+1 STR熒光檢測試劑盒（中德美聯(lián)）等。

三、分型檢測
儀器：3500系列基因分析儀（AB公司）

四、數(shù)據(jù)分析
利用GeneMapper軟件對STR擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行分析，最終得到如下圖的分析結(jié)果。圖中展示了6個常染色體的位點(diǎn)和決定性別的位點(diǎn)Amel，圖中所示樣本為一個男性，Amel位點(diǎn)為XY，vWA位點(diǎn)為14和18兩個等位基因，TPOX位點(diǎn)為兩個相同的8。在此數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，可以進(jìn)行嫌疑人的排查、親子鑒定、罪犯鎖定等。